ZY Rev Star cDNA 合成试剂盒
ZY Rev Star cDNA 合成试剂盒是一款高效、便捷、减少污染的高质量第一链 cDNA 合成试剂盒。
15 min
第一链 cDNA 合成
55℃
高温逆转录
50 ng–1 μg
总 RNA 模板投入
100T
试剂盒规格
第一链 cDNA 合成
高温逆转录
总 RNA 模板投入
试剂盒规格
ZY Rev Star cDNA 合成试剂盒是一款高效、便捷、减少污染的高质量第一链 cDNA 合成试剂盒。它集成热稳定的 M-MLV GIII 逆转录酶、RNA 酶抑制剂、dNTPs、Oligo(dT)20VN 与随机引物，仅需加入 RNA 模板与无核酸酶水即可启动反应。
内置 dsDNase 可在逆转录温度下快速、不可逆地失活，无需 EDTA 处理即可高效去除基因组 DNA 污染，从源头避免 qPCR 假阳性。无论是真核生物 mRNA，还是原核 RNA、rRNA/tRNA 等非 Poly(A) 模板，均可稳定获得用于 qPCR 的可靠 cDNA。
| 产品名称 | 货号 | 规格 | 适用下游 | 价格 |
|
ZY Rev Star cDNA 合成试剂盒 （逆转录试剂盒） |
ZY-RScDNA-100 | 100 次反应 （100T） |
实时荧光定量 PCR （qPCR / RT-qPCR） |
询价 |
ZY Rev Star 逆转录试剂盒基于 M-MLV 反转录酶，将 RNA 模板逆转录为第一链 cDNA。5× 预混液集成逆转录酶、Oligo(dT)20VN、随机引物、dNTPs 与 RNase 抑制剂，通过双引物系统实现广谱模板覆盖；同时引入 dsDNase 模块，高效去除 gDNA 污染，并支持一步法 / 两步法两种路径。
| 步骤 | 操作 |
| 1 配制体系 | 冰上加入模板 RNA 50 ng–1 μg、5X Master Mix 2 μL、dsDNase 0.5 μL， 以 Nuclease-Free Water 补至 10 μL。 |
| 2 混匀 | 轻柔吸打混匀并瞬时离心。 |
| 3 去除 gDNA | 37℃ 温育 2 min。 |
| 4 第一链合成 | 55℃ 温育 15 min。 |
| 5 终止反应 | 85℃ 温育 5 min。 |
| 6 保存 | 置冰上用于后续 qPCR；-20℃ 建议不超过 1 周， -80℃ 可长期储存，避免反复冻融。 |
| 阶段 | 配制与反应 |
| gDNA 去除 | 模板 RNA + dsDNase 0.5 μL + 10× dsDNase Buffer 0.5 μL + 水至 5 μL； 37℃ 2 min（污染重可延至 5 min），65℃ 2 min 失活 dsDNase。 |
| 第一链合成 | 取上述产物 5 μL + 5X Master Mix（All-in-One）2 μL + 水至 10 μL； 50℃ 15 min（无 Poly(A) 模板可先 25℃ 10 min），85℃ 5 min 终止。 |
不含 Poly(A) 结构的模板建议采用两步法，以获得更高产量。
| 组分 | 一步法（10 μL） | 两步法-去 gDNA（5 μL） | 两步法-合成（10 μL） |
| 模板 RNA | 50 ng–1 μg | 50 ng–1 μg | 上一步产物 5 μL |
| ZY Rev Star 5X Master Mix | 2 μL | — | 2 μL |
| dsDNase | 0.5 μL | 0.5 μL | — |
| 10× dsDNase Buffer | — | 0.5 μL | — |
| Nuclease-Free Water | 补至 10 μL | 补至 5 μL | 补至 10 μL |
| 反应条件 | 37℃ 2 min + 55℃ 15 min | 37℃ 2 min → 65℃ 2 min | 50℃ 15 min（无 Poly(A) 先 25℃ 10 min） |
两步法“第一链合成”所用的 5X Master Mix 即本试剂盒组分 ZY Rev Star cDNA Synthesis Master Mix（5X）。
细胞中提取的 RNA 常残留基因组 DNA；若逆转录前不去除，下游 qPCR 时 gDNA 与 cDNA 会同时被扩增，导致基因表达定量偏高、结果失真。本试剂盒用 dsDNase 在逆转录前特异性消化双链 DNA。
传统 DNase I 需额外加入 EDTA 才能失活，操作繁琐且 EDTA 残留可能抑制逆转录；本试剂盒 dsDNase 在逆转录升温阶段即可快速、不可逆地失活，无需 EDTA。
基因组 DNA 含量低的样品推荐一步法；若样本 gDNA 污染严重，建议两步法，先去 gDNA 并于 65℃ 失活 dsDNase，再单独进行第一链合成。
本试剂盒主打 qPCR 模板合成，产物满足常规荧光定量需求。因采用随机引物，不建议用于真核生物全长 cDNA 克隆；克隆用途请参考质因生物 cDNA/ORF 克隆服务。
适配 Poly(A)+ 真核 mRNA，以及原核 RNA、真核 rRNA/tRNA 等非 Poly(A) 模板；miRNA 等小 RNA 不适用。
cDNA 可直接用于 qPCR；短期置于 -20℃（建议不超过 1 周），长期 -80℃ 储存，避免反复冻融。
本试剂盒采用热稳定 M-MLV GIII 逆转录酶，支持 55℃ 高温反转录，可有效解开高 GC / 复杂二级结构，提高困难模板的反转录效率。