克隆和突变
克隆和突变
质因生物提供定制化基因克隆和定点突变服务。无酶切位点限制,支持任意载体、任意位置克隆;
覆盖碱基替换、插入、删除及组合突变,Sanger测序确保序列准确,快至1-7个自然日交付。
  • 1-7天

    最快交付周期

  • 不限载体

    克隆位置自由

  • 100%

    序列验证准确率

  • 200+

    免费载体现货

基因克隆
定点突变
克隆+突变套餐

基因克隆 / 亚克隆

不依赖酶切位点的精准克隆

传统限制性内切酶克隆受载体和目的片段酶切位点限制。我们采用同源重组克隆技术,无需依赖载体酶切位点,可将目的基因精确克隆至任意载体的指定位置。

支持从质粒DNA、基因组DNA、cDNA或PCR产物扩增目的片段,也支持同一基因在不同载体间批量亚克隆。

  • 任意模板、任意载体、任意位置精准插入
  • 支持高通量同片段多载体并行亚克隆
  • 客户可提供自有载体或选用200+种免费载体
基因克隆同源重组示意图

定点突变

精准改造,揭示基因功能

通过对目标DNA序列进行精确的碱基替换、插入或删除,研究者可以直接关联特定氨基酸与蛋白质功能之间的关系,验证关键结构域的作用,或优化蛋白质的生化特性。我们支持单点突变、多点突变、插入突变和缺失突变等多种类型。

  • 碱基替换:单点或多点替换
  • 插入突变:插入标签、酶切位点或功能序列
  • 缺失突变:删除指定碱基或结构域片段
  • 组合突变:多种突变类型灵活组合
定点突变示意图

克隆 + 突变套餐

一站式完成序列构建与精准改造

针对目标基因需要同时克隆和突变的项目,提供从序列设计、基因获得、载体克隆、定点改造到Sanger测序验证的一站式服务。

  • 减少多次交付与沟通成本
  • 总周期更短、整体费用更优
  • 统一QC标准,确保数据一致
克隆与突变组合服务示意图

如何选择:克隆 vs 克隆+突变套餐

根据您的实际需求选择最合适的服务方式
单纯克隆服务

客户提供模板DNA + 目的载体:

  • 已有目标片段和载体
  • 仅需扩增和克隆操作
  • 无需引入突变
  • 项目简单,周期较短
  • 费用最低
  • 适合常规的亚克隆需求
克隆+突变组合套餐

客户提供突变要求,我们一站式交付:

  • 目标基因需要同时克隆和突变
  • 基因合成→克隆→突变无缝衔接
  • 减少多次交付的沟通和时间成本
  • 总周期更短、总费用更优
  • 统一QC标准,数据一致
  • 适合从序列设计开始的整体项目

服务优势

以成熟的分子克隆技术平台和丰富的项目经验,确保每一个克隆和突变项目的精准交付
  • 无载体限制
    采用同源重组技术,不依赖限制性内切酶位点。可克隆至任何载体的任意位置,无论载体大小、是否含有合适多克隆位点。
  • 定制化方案设计
    针对客户的特定需求(特殊载体、毒性基因、大片段克隆等),提供一对一的技术方案设计,确保项目可行性与交付成功率。
  • Sanger测序全覆盖
    所有克隆和突变项目均经全套Sanger测序验证,不仅覆盖插入/突变区域,同时检查载体骨架关键元件,确保质粒完整无误。
  • 快速交付
    成熟的标准化操作流程,常规克隆项目(<2kb)快至1-7个自然日交付。加急通道可进一步缩短周期,满足紧迫的实验需求。
  • 丰富的模板处理经验
    支持从质粒DNA、基因组DNA、cDNA、PCR产物、菌液、菌落等多种材料起始,灵活适应不同客户的样本条件。
  • 严格保密
    所有客户的序列信息、载体信息和项目数据均实行严格保密管理,可签署正式保密协议(NDA),充分保障知识产权。

服务详情

基因克隆、定点突变类型及标准交付周期
基因克隆:支持从质粒DNA、基因组DNA、cDNA或PCR产物扩增目的片段,也支持同一基因在不同载体间批量亚克隆。
序列类型 长度 交付周期(自然日) 适用场景
常规序列
0 - 2 kb 1 - 7 标准基因克隆,快速交付
2 kb - 3 kb 7 - 12 较大基因片段克隆
3 kb - 4.5 kb 12 - 15 长片段克隆,分段组装验证
4.5 kb - 5 kb 15 - 20 大片段克隆,需多步操作
> 5 kb
咨询
超大片段,根据具体序列评估
难度序列
1 kb - 5 kb
咨询
高GC、重复序列、毒性基因等
定点突变:支持碱基替换、插入突变、删除突变与组合突变。
突变数量 长度 交付周期(自然日) 说明
1处突变
0 - 2 kb 1 - 7 快速突变,最短周期
2 kb - 3 kb 7 - 12 中等质粒突变
3 kb - 4.5 kb 12 - 15 较大质粒突变
4.5 kb - 5 kb 15 - 20 大质粒突变
> 5kb 或难度序列
咨询
根据具体序列和突变位置评估
2处突变
0 - 2 kb 1 - 10 双点突变,需两轮操作
2 kb - 3 kb 10 - 15 中等质粒双位点突变
3 kb - 4.5 kb 15 - 20 较大质粒双位点突变
4.5 kb - 5 kb 20 - 25 大质粒双位点突变
> 5kb 或难度序列
咨询
需评估位点间距和复杂度
多处突变
咨询
3处及以上突变,根据总突变数量评估

以上周期基于标准商用载体和常规大肠杆菌宿主;特殊载体或宿主的周期需根据具体项目评估。

服务流程

从需求提交到质粒交付,全程透明可追踪
  • 提交需求
    提供模板序列、载体信息及克隆或突变要求。
  • 方案评估
    1个工作日内完成可行性分析、方案设计与报价。
  • 实验执行
    PCR扩增或突变、载体构建、转化、阳性克隆筛选及测序验证。
  • 交付售后
    交付质粒DNA、甘油菌、测序报告及QC文件并提供技术支持。

客户需提供信息

准备完整资料可帮助项目快速启动
  • 克隆项目所需
    · 目标基因完整序列;
    · 模板材料(质粒DNA≥1μg、甘油菌、PCR产物或基因组DNA);
    · 目的载体名称、图谱、抗性标记;
    · 期望克隆位点或插入位置。使用自有载体时建议提供测序结果或寄送质粒。
  • 突变项目所需
    · 模板质粒完整序列;
    · 质粒DNA≥2μg(推荐)或甘油菌;
    · 明确突变位置、原始碱基与目标碱基;
    · 插入突变需提供插入序列,缺失突变需说明起止位置;
    · 确认载体抗性标记。

交付标准

每一份克隆与突变项目均按严格标准交付,确保您拿到即可投入下游实验
  • 质粒DNA
    交付 5μg 含有目的片段的高纯度质粒DNA,可选冻干粉(便于保存与运输)或液体形式。
  • 甘油菌(可选)
    提供含正确质粒的甘油菌(大肠杆菌DH5α或指定宿主),-80℃保种,随时可复苏使用。
  • 标准序列文件
    提供FASTA/GenBank格式的最终质粒序列文件,完整标注插入片段、突变位点及载体关键元件。
  • 测序结果
    Sanger测序原始图谱(.ab1格式)及完整的序列比对报告(含突变区域验证),确保序列正确无误。
  • 质粒图谱
    提供标注完整的质粒结构图,清晰展示复制原点、抗性基因、启动子、多克隆位点、插入片段及突变位点。
  • COA质量报告
    附带质检合格证书(Certificate of Analysis),记录质粒浓度、纯度(A260/A280比值)、交付量等关键参数。

应用场景

基因克隆与定点突变在分子生物学研究中的广泛应用
表达载体构建

表达载体构建

将目的基因克隆至适合的表达载体(蛋白表达、哺乳动物细胞表达等),用于后续蛋白表达纯化或功能实验。

载体系统转换

载体系统转换

将同一目的基因在不同载体系统之间进行亚克隆转换(如从克隆载体转至表达载体、从原核载体转至真核载体)。

标签融合

标签融合

在目的基因的N端或C端添加荧光蛋白(GFP/mCherry等)或纯化标签(His/Flag/HA/GST等),便于后续检测与纯化。

功能位点验证

功能位点验证

通过定点突变改变关键氨基酸(如催化三联体、磷酸化位点、结合位点),验证其对蛋白质功能的影响。

活性优化改造

活性优化改造

通过引入特定突变改变酶的底物特异性、催化效率、热稳定性或pH耐受范围,用于蛋白质工程。

截短体构建

截短体构建

通过缺失突变构建蛋白质截短体,用于结构域功能定位、最小功能区域鉴定、结晶条件优化等研究。

启动子/调控元件分析

启动子/调控元件分析

克隆不同长度的启动子片段至报告基因载体,或通过定点突变改变转录因子结合位点,研究基因表达调控机制。

病毒载体构建

病毒载体构建

将目的基因克隆至慢病毒、AAV、腺病毒等病毒表达载体中,用于基因递送和基因治疗相关研究。

常见问题

关于克隆技术、模板、突变设计和质粒使用的常见问题
你们的克隆技术与限制性内切酶克隆有什么不同?
传统限制性内切酶克隆需要目的片段和载体有匹配的酶切位点,且通常需要多步酶切-连接-转化,步骤繁琐且耗时。我们采用同源重组克隆技术:

· 不依赖载体上的酶切位点,可以将片段插入任意位置
· 一次重组即可完成,无需多步酶连
· 特别适合酶切位点不匹配或大片段克隆的场景
· 阳性克隆率高,减少筛选工作量
可以使用自己的载体吗?需要提供哪些信息?
完全可以。您需要提供:

· 载体的完整序列(推荐提供测序验证过的序列)
· 载体图谱或质粒信息(抗性标记、拷贝数等)
· 物理质粒或甘油菌(如序列信息不完整时)
· 期望的插入位点位置

如果您没有合适载体,也可以从我们200+种免费载体库中选用。
定点突变成功率有多高?
对于常规序列(GC含量正常、无复杂二级结构),单点突变的成功率接近100%。对于多点突变或复杂模板,我们会提前进行序列评估,并与您沟通最佳方案。所有突变结果均通过Sanger测序验证,确保序列完全正确后才会交付。如果在正常实验条件下未能获得正确克隆,我们将与您协商替代方案。
一个突变单位如何定义?
一个突变单位的定义为:在同一条引物覆盖范围内(约30bp窗口),进行的任意数量碱基改变。例如:

· 单个碱基替换 = 1处突变
· 连续3个碱基替换(改变1个密码子)= 1处突变
· 插入一段10bp的标签序列 = 1处插入突变
· 删除20bp的结构域片段 = 1处缺失突变

如果两个突变位点相距较远(需要独立设计两对引物),则计为2处突变。
如果我的模板序列不确定(未测序过),该怎么办?
建议先对您的模板质粒进行全质粒测序,确认序列后再进行克隆或突变操作。我们的上游服务中包括全质粒测序,可以为您一站式解决。在序列不确定的情况下直接进行PCR克隆或定点突变,存在因模板本身存在突变而导致结果错误的风险。
能否在同一项目中进行多处突变?
可以。我们支持单点、双点和多处组合突变。对于3处及以上的多点突变,有以下两种策略:

· 顺序突变法:逐一引入突变,每步验证后再进行下一个。适合突变位点相距较远的情况,周期较长但每一步可控。
· 基因合成+突变:如果突变较多,建议直接合成含所有突变位点的新基因片段替代原有序列,周期更短、性价比更高。

具体方案请与我们的技术支持沟通,我们将根据您的实际情况推荐最优策略。
交付质粒可以直接用于转染或转化吗?
可以。交付的质粒DNA已达到分子生物学实验级别纯度(A260/A280 ≈ 1.8-1.9),可直接用于:

· 大肠杆菌转化
· 哺乳动物细胞转染(标准级)
· PCR扩增(作为模板)
· 限制性酶切分析
· 体外转录(IVT)

如需无内毒素级别(转染级)或体内注射级质粒,可联系我们选择升级制备服务。

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