常规交付周期
ORF序列准确性
载体现货
标准质粒DNA交付
ORF（Open Reading Frame，开放阅读框）克隆是将基因的蛋白编码区（从起始密码子ATG到终止密码子）克隆至表达载体的技术。与普通cDNA克隆不同，ORF克隆去除了5'和3'非翻译区（UTR），避免了UTR可能形成的复杂二级结构对翻译效率的影响，可直接用于哺乳动物细胞、昆虫细胞或大肠杆菌中的蛋白表达。
我司提供专业ORF克隆与表达载体构建服务，拥有大量cDNA现货模板库存，同时支持从cDNA、基因组DNA或人工合成DNA三种来源扩增目的ORF序列。每条ORF克隆均提供NCBI基因序列号、基因别名、ORF区序列、氨基酸序列、克隆载体及标签信息。
适用于将已获得的目的ORF片段从现有载体转移至新的表达载体、标签载体或穿梭载体中。凭借丰富的酶切连接经验和先进的无缝克隆技术，高效处理酶切位点兼容性、长片段转移及多片段串联等复杂情况。
适用于从cDNA、基因组DNA或现有质粒中直接扩增目的ORF序列。采用高保真聚合酶与优化反应体系，确保扩增产物具有高保真性和高特异性。
| 对比维度 | ORF克隆（本服务） | cDNA克隆 |
| 序列范围 | 仅开放阅读框（ATG至终止密码子），去除UTR | 全长转录本，含5'/3'UTR |
| 载体类型 | 表达载体（如pCMV系列），含强启动子 | 克隆载体（如pUC19/pMD19-T） |
| 用途 | 可直接转染细胞表达蛋白 | PCR模板、测序模板、基因功能研究 |
| 标签 | 可选His/FLAG/HA/Myc/GFP等标签 | 通常无标签 |
| 表达验证 | 是，经蛋白表达验证 | 否，仅序列验证 |
| 即用性 | 即用型，无需亚克隆 | 需进一步亚克隆至表达载体 |
| Kozak序列 | 含，增强翻译效率 | 通常无 |
| 适用场景 | 蛋白过表达、纯化、定位、稳定株 | 基因克隆模板、qPCR、文库构建 |
选择建议：直接在细胞中表达目的蛋白进行功能研究、纯化或定位观察，选择ORF克隆；仅需基因序列作为PCR模板或进行基础研究，选择cDNA克隆。
| 模板来源 | 适用场景 | 特点 |
| 现货cDNA模板 | 热门基因，已在现货库中 | 最快交付，成本低，序列已验证 |
| 客户提供的cDNA | 自有cDNA文库或质粒 | 需提供测序验证，加收测序验证费 |
| 基因组DNA | 无内含子基因或原核基因 | 直接从基因组扩增，无需mRNA |
| 人工合成DNA | 无模板、需密码子优化或序列改造 | 灵活性最高，可定制任何序列 |
亚克隆服务（Subcloning）:将已有质粒中的ORF片段通过酶切或PCR扩增后重新连接至目的表达载体，适用于载体间转移、标签添加、启动子替换等场景。
PCR克隆服务（PCR Cloning）:以cDNA、基因组DNA或人工合成DNA为模板，通过PCR扩增获取ORF片段后克隆至表达载体。
| 基因长度 | 交付周期（自然日） | 价格 |
| < 3 kb | 5 - 15 |
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| 3 kb ~ 4 kb | 15 - 20 |
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| 4 kb ~ 5 kb | 20 - 25 |
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| > 5 kb | 项目评估 |
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| 附加服务 | 说明 | 周期 |
| 标签添加 | N端或C端添加FLAG/HA/His/Myc/GFP等标签 | 2-3个工作日 |
| 密码子优化 | 根据表达宿主优化密码子使用偏好，提升蛋白表达量 | 1-2个工作日 |
| 去内毒素质粒制备 | 适用于转染级质粒需求，内毒素<0.1 EU/μg | 3-5个工作日 |
| 大规格质粒制备 | Midi(>100μg) / Maxi(>500μg) / Mega(>2mg) / Giga(>10mg) | 5-7个工作日 |
| QC环节 | 检测方法 | 合格标准 |
| 序列准确性 | 全长Sanger测序（双向） | ORF区与参考序列100%一致 |
| 质粒纯度 | 紫外分光光度法 | A260/A280 = 1.8 ~ 2.0 |
| 质粒浓度 | 紫外吸收法 | ≥5 μg（标准交付量） |
| 片段大小 | 菌落PCR / 酶切验证 | 与预期ORF片段大小一致 |
| 菌种活性 | 甘油菌复苏培养 | 复苏后菌落生长正常 |
| 内毒素水平 | LAL鲎试剂法（去内毒素规格） | < 0.1 EU/μg |
| 标签 | 位置 | 适用场景 | 优势 |
| His (6xHis) | N端或C端 | 蛋白纯化（IMAC）、Western Blot检测 | 小标签，不易干扰蛋白功能； 纯化简便低成本 |
| FLAG | N端或C端 | 蛋白纯化、免疫沉淀 （IP/Co-IP）、检测 |
小标签，高亲和力抗体，背景低 |
| HA | N端或C端 | 免疫检测、免疫沉淀 | 小标签，抗体成熟可靠 |
| Myc | N端或C端 | 免疫检测、细胞定位 | 小标签，广泛使用的检测标签 |
| GFP / EGFP | 通常C端 | 活细胞定位、表达验证、FRET | 荧光直接观察，无需抗体； 可活细胞动态追踪 |
| mCherry | 通常C端 | 活细胞定位、多色共定位 | 红色荧光，与GFP搭配双标 |
| Untagged | 无 | 标签可能干扰功能/折叠时 | 最接近天然蛋白，但需自有抗体检测 |
将ORF克隆至含His、GST、Flag、GFP等标签的表达载体，在HEK293、CHO、大肠杆菌或昆虫细胞中高效表达。
构建ORF过表达载体，研究细胞增殖、分化、凋亡、迁移，并结合定点突变解析关键残基。
生产重组抗原蛋白，用于单克隆抗体制备、免疫检测、疫苗开发与候选靶点活性评价。
将治疗性基因ORF克隆至慢病毒、AAV等载体，用于基因替代治疗或CAR-T产品构建。
用于代谢通路重构、酶工程改造和生物传感器开发，支持模块化组装与高通量筛选。
