内毒素（LPS）是大肠杆菌外膜成分，裂解时释放并会与质粒共纯化。它会与质粒竞争结合细胞膜降低转染效率，通过 TLR4 激活免疫细胞释放炎症因子，干扰目的基因表达，体内注射还可能引发全身炎症。按细胞敏感度可选 <0.05、<0.01 或 <0.005 EU/μg 三档。

Mini（10–30 μg）适合酶切、测序、PCR 验证；Midi（100–200 μg）适合 6 孔板 / 10 cm 皿转染；Maxi（0.5–1 mg）适合 T75 / 15 cm 皿转染或小动物注射；Mega（2–5 mg）适合大动物实验或多次转染；Giga（10–50 mg）适合大规模需求。参考用量：6 孔板单次约 2–5 μg，T75 约 10–20 μg。

小提从 1–5 mL 菌液用试剂盒快速纯化，得率 10–30 μg，1–2 个工作日；大提需 100–500 mL 甚至更大体积培养，涉及大规模碱裂解、过滤与色谱纯化，QC 项目也更多，周期 3–7 天。大提的难点在于避免机械剪切造成断裂并保持一致的超螺旋比例。

超螺旋是质粒在菌体内的天然构型，体积更紧凑、更易穿过细胞膜，在细胞内更抗核酸酶降解，转录效率也更高，因此转染效率显著优于开环或线性构型。我们的转染级质粒超螺旋比例 ≥90%，经琼脂糖凝胶电泳密度扫描定量验证。

可以。低拷贝质粒（如 pBR322 / pSC101 来源）同等培养体积得率仅为高拷贝质粒的 1/5–1/10。我们通过扩大培养体积、优化裂解条件和专用纯化柱提高得率，建议起始规格提升一档（如高拷贝选 Maxi 时低拷贝选 Mega），周期可能延长 1–2 天。

液体质粒短期（1–2 周）4℃，长期 -20℃ 或 -80℃ 保存，避免反复冻融（每次冻融会降低超螺旋比例）；冻干质粒 -20℃ 或 4℃ 避光可稳定 2–3 年，用无菌水或 TE（pH 8.0）复溶至所需浓度；甘油菌 -80℃ 可保存 5 年以上，需要时划线复苏。建议大提质粒分装多管保存。